Analyse av RNA ved Northern Blotting Using Riboprobes.

Analyse av RNA ved Northern Blotting Using Riboprobes.

Rai Ajit K. Srivastava.

For a studere ekspresjonen av et gen i pattedyrsvev, er det viktig a bestemme nivaene av det tilsvarende mRNA. Flere metoder er blitt beskrevet for a male nivaet av ekspresjon av et gen i et vev. Disse metodene er: in situ hybridisering ved bruk av cDNA-probe eller riboprobe (1), slotblot-hybridisering pa totalt RNA isolert fra vev (2) og Northern blotting-hybridisering ved bruk av enten et cDNA (3) eller en riboprobe (4). Absolutte nivaer av et spesifikt mRNA bestemmes ogsa ved RNase-beskyttelsesanalyse ved bruk av en cDNA-probe (5) eller en rrboprobe (6). In situ hybridisering gir relativ ekspresjon av et gen, mens spalt-blot-teknikken ikke er sensitiv nok til noyaktige malinger av mRNA. Den mest brukte teknikken for a male mRNA-nivaer i pattedyrsvev, er fortsatt Northern Blotting Analys, hvor totalt RNA eller poly (A +) RNA separeres av elektroforese i en agarosegel som inneholder formaldehyd og overfores til mtrocellulose eller nylonmembran. De overforte RNAene pa membranen blir deretter denaturert og probet med en merket c DNA-probe eller en riboprobe. Mens en cDNA-probe gir den samme mformasjonen som riboprobe, okes folsomheten til deteksjon av mRNA flere ganger ved bruk av en riboprobe (ref 4 og figur 1) pa grunn av den okte affiniteten til riboprobe for komplement r sansstreng av mRNA og den hoyere stabiliteten til det dobbeltstrengede RNA etter hybridisering. Imidlertid kan folsomheten til forskjellige membraner variere marginalt nar du bruker en riboprobe (4). Saledes gjor den hoyere folsomheten til riboprober i Northern Blotting-analyse dem et bedre valg over cDNA-prober, spesielt nar det oppdages en lav overflodmelding. Imidlertid ma det tas hensyn nar du bruker riboprober for Northern Blotting-analyse siden feil bruk av riboprobes kan gi sv rt hoy bakgrunn, ofte ved irreversibel binding av riboprobe til membranen. Derfor ma trinnene som vises i dette kapittelet folges strengt for a unnga bakgrunnsstoy.

Springer Nature utvikler et nytt verktoy for a finne og evaluere protokoller. L re mer.

Referanser.

Opphavsrettsinformasjon.

Forfattere og tilknytninger.

Rai Ajit K. Srivastava 1 1. Institutt for intern medisin Washington University School of Medicine St. Louis.

Om denne protokollen.

Personlige anbefalinger.

Cite protokoll.

.RIS Papers Reference Manager RefWorks Zotero.

.BIB BibTeX JabRef Mendeley.

Oyeblikkelig nedlasting Lesbar pa alle enheter Eie den for alltid Lokal omsetningsavgift inkludert hvis aktuelt.

Cite protokoll.

.RIS Papers Reference Manager RefWorks Zotero.

.BIB BibTeX JabRef Mendeley.

Over 10 millioner vitenskapelige dokumenter pa fingertuppene.

Switch Edition.

&kopiere; 2017 Springer International Publishing AG. En del av Springer Nature.